细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一种分子量为35.8 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)高亲和力特异结合。FITC-Annexin V结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶(Propidium iodide，PI)是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将FITC-Annexin V与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。
1.组织经福尔马林固定后会产生广泛的蛋白质交连，因此石蜡组织进行凋亡检测时要进行预处理。经我公司科研人员的长期研究认为：TUNEL染色时蛋白酶K的作用有可能引起内源性核酸内切酶的释放，造成假阳性反应，同时过量的蛋白酶K处理可破坏组织的结构，用微波技术替代上述处理可避免上述弊端的出现。
2.微波已被愈来愈多地作为免疫组织化学和原位杂交的预处理过程，经一定温度的微波处理可修复因固定和包埋造成的抗原破坏，打断氨基酸的肽键结合，促进抗原决定簇的暴露，恢复细胞膜的空间结构，增加穿透效应，加速组织处理及染色过程。我们在作TUNEL染色前进行微波修复，可以达到蛋白酶K的功效，取得较为理想的效果，背景染色很浅，凋亡细胞阳性颗粒与背景染色对比非常鲜明。
3.蛋白酶K作用的条件严格，消化度常因组织的不同而在操作中不便掌握。同时蛋白酶K的价格昂贵，而微波已作为一种常用仪器用于免疫组织化学染色中。
(1)切片常规脱蜡入水
(2)将一烧杯盛200ml的0.01M、pH6.0的柠檬酸缓冲液，加热至90～95℃，迅速放入切片，使用680W(80%功率)、微波照射1min，加入双蒸水(20～25℃)80ml作迅速冷却，将玻片移至PBS(20～25℃)。(3)PBS洗5min×3次。
(4)加20%正常牛血清室温30min。
(5)将TUNEL反应混合液加在切片上，37℃温育90min(阴性对照片、TUNEL混合液中不加TDT)。
(6)PBS洗5min×3次。
(7)3%H2O2甲醇液室温阻断10min。
(8)37℃温育90min。
(9)加POD转化剂，37℃温育30min。
(10)PBS洗5min×3次。
(11)DAB/H2O2显色。
(12)苏木素淡染，常规脱水，透明，中性树胶封固。
结果：细胞核呈棕色颗粒者为阳性细胞，结合形态特征，可确立凋亡细胞。阴性对照片无棕色颗粒。
