本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中猪弓形虫抗体（Tox-Ab）。用纯化的弓形虫抗体（Tox-Ab）抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中弓形虫抗体（Tox-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的弓形虫抗体（Tox-Ab）抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中弓形虫抗体（Tox-Ab）的存在与否。

　　二、猪弓形虫抗体检测的试验操作步骤：

　　1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

　　2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。