猪流行性腹泻病毒是引起仔猪严重腹泻、脱水乃至高死亡率的重要冠状病毒，给全球养猪业带来巨大经济损失。快速准确的诊断与严格的实验室质量控制，是实现疫情早发现、早处置的关键。
一、主要诊断方法
临床症状与流行病学判断
发病集中在冬春季节，哺乳仔猪呕吐、水样腹泻、脱水死亡为主要特征。但仅凭症状无法确诊，需结合实验室检测。
样品采集与保存
常用样品为发病仔猪小肠组织(尤其是空肠、回肠)、肠内容物及直肠拭子。采集后应迅速置于含抗生素的转运液，-70℃或液氮保存，避免反复冻融。
分子生物学检测
RT‑qPCR：目前金标准方法，针对PEDV N基因或S基因保守区设计引物探针，灵敏度高、特异性好，可定量病毒载量。
RT‑PCR+电泳：适用于基层实验室，成本低但通量与灵敏度不及qPCR。
基因测序：对S1区测序可进行基因型(G1/G2)及变异株分析，为疫苗匹配与流行病学追踪提供依据。
抗原与抗体检测
抗原ELISA/免疫荧光(IF)：适用于快速筛查粪便或肠道匀浆中的病毒抗原，适合现场或初筛实验室。
血清抗体检测(IgG/IgA)：用于评估群体免疫状况或感染史，但无法区分野毒与疫苗免疫，需结合临床与分子检测。
二、实验室质量控制要点
环境与分区
分子检测应在PCR专用负压实验室进行，严格划分试剂准备区、样本处理区、扩增区与产物分析区，防止交叉污染。
试剂与耗材管理
使用经过验证的核酸提取试剂盒、逆转录酶与qPCR Mix；所有试剂应在有效期内，分装保存避免反复冻融。耗材一次性使用，避免核酸残留。
核酸提取与防污染
提取过程戴手套、口罩、一次性外套，使用带滤芯枪头；每批次提取设阴性对照(无模板水)监控污染。
PCR反应体系与运行
配制反应体系时避免气泡，使用校准移液器；设立阳性对照(已知PEDV RNA)、阴性对照与空白对照，确保扩增曲线与CT值稳定。
结果判读与复核
建立CT值判定阈值与重复检测规则；对临界值样本应重提核酸或更换引物批号复测；异常扩增曲线需分析原因并记录。
记录与可追溯
实验原始数据、仪器使用日志、质控结果应完整保存，至少保留3–5年，满足生物安全与质量审计要求。
猪流行性腹泻病毒的诊断需结合临床症状、流行病学与多种实验室手段，并以严谨的质量控制措施确保结果可靠。只有在采样、检测、数据分析全流程标准化、可追溯的前提下，才能为猪场疫病防控与净化提供科学依据。
