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鸡胰岛细胞分离液试剂盒

鸡胰岛细胞分离液试剂盒

产品型号: ISC2011C

所属分类:分离液试剂盒

产品时间:2023-07-23

简要描述:本品用于分离鸡胰岛细胞
Store at: RT° C Size :2X100ml/kit
试剂盒内容
试剂:全血及组织稀释液 100ml
试剂:细胞洗涤液 100ml
试剂B: 100ml
试剂D: 100ml
说明书 1份

详细说明:

操作说明 细胞分离液试剂盒操作说明::::

Store at:::RT 试剂盒规格::::2×100ml/Kit

鸡胰岛细胞分离液试剂盒试剂盒内容:

货号                     品牌              产品名称          规格         报价

淋巴细胞分离液    
LTS1077TBD人外周血淋巴细胞分离液200ml200
LTS1077-1TBD人外周血淋巴细胞分离液(FICOLL配置)200ml400
LTS1083TBD大鼠外周血淋巴细胞分离液200ml400
LTS1083PTBD大鼠脏器组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS1083ZTBD大鼠肿瘤浸润组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS1092TBD小鼠外周血淋巴细胞分离液200ml400
LTS1092PTBD小鼠脏器组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS1092ZTBD小鼠肿瘤浸润组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS10965TBD兔外周血淋巴细胞分离液200ml400
LTS10965PTBD兔脏器组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS10965ZTBD兔肿瘤浸润组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS1079TBD狗外周血淋巴细胞分离液200ml400
LTS1079PTBD狗脏器组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS1079ZTBD狗肿瘤浸润组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS1086TBD牛外周血淋巴细胞分离液200ml400
LTS1086PTBD牛脏器组织淋巴细胞分离液100ml400
LTS1086ZTBD牛肿瘤浸润组织淋巴细胞分离液100ml400

全血及组织稀释液 100ml

细胞洗涤液 100ml

试剂 B 100ml

试剂 D 100ml

说明书 1

一、、、、分离方法说明及图例

A. 10ml 15ml 玻璃离心管中依次小心加入 BD 两种液体各 2ml,制成梯度界面(各液面分层一定要清晰);

B.取 1ml新鲜抗凝血与全血及组织稀释液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取组织匀浆单细胞悬液(细胞浓度为2×108-1×109/ml,具体制备方法参照

“二、组织单细胞悬液的制备”)小心加于D液之液面上;

C. 400g(约1500/分)离心15分钟(半径15cm水平转子)

此时离心管中由上至下细胞分为五层。*层;为血浆层或组织匀浆液层。第二层;为

富含胰岛细胞的 D 液层。。。。第三层;为单个核细胞层。第四层;为透明 B 液层。第五层;为红细胞层。收集第二层富含胰岛细胞的 富含胰岛细胞的 富含胰岛细胞的 D 液层放入含 4-5ml 细胞洗涤液(Cat#2010X1118)的试管中,充分混匀后,以 500g(约 1800 /分)离心 20 分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤 2 次即得所需胰岛细胞。

注::::A. 提取率约为 80%

注::::A.. .. 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法,,,,酶消化法由于各实验室选取的消化 酶消化法由于各实验室选取的消化酶种类各不相同, 酶种类各不相同,,,请各实验室自行选择进行试验 请各实验室自行选择进行试验 请各实验室自行选择进行试验。。。。全过程及所需试剂要求无菌环境 全过程及所需试剂要求无菌环境 全过程及所需试剂要求无菌环境。。。。 剪碎法::::将组织块放入平皿后,加入少量组织匀浆液及 20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪至匀浆状,加入 5ml 组织匀浆液及 20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用 100 目不锈钢滤网

(另购)过滤到试管内;离心沉淀 1500/分×3 min,再用细胞洗涤液清洗 3次,每次以 500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以 200 目不锈钢滤网(另购)过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(25)×107/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用 20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为 2×108-1×109/ml 的单细胞悬液备用。

匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入 70ml 组织研磨器内,加入 2ml 组织匀浆液及 20% 匀浆器法胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨至匀浆;用 5ml 组织匀浆液及 20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经 200 目不锈钢滤网(另购)过滤;离心沉淀 800rpm×2min ,再用细胞洗涤液洗 3 次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(25)×107/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用 20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为 2×108-1×109 /ml 的单细胞悬液备用。 细胞计数方法: 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。既可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于

对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。

1)、在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,至

盖玻片被液体充满为止。

3)、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,

对于细胞团按单个细胞计数。

4)、按下式计数细胞悬液的密度:

细胞密度=(4 个大格细胞总数/4)×104/ml×稀释倍数

公式中乘以 104因为计数板中每一个大格的体积为:

1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3

  1ml1000mm3

细胞计数要点::::

A 进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于 104/ml,如果细胞数目很少要进行离

心再悬浮于少量培养液中;显微镜下计数时,遇到 2 个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数<200 /10mm2>500 /10 mm2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。

B 要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。

C 取样前充分混匀细胞悬液,尤其多次取样更要注意每次取样都要混匀,以求计数准确;

D 数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照一个细胞计算。如果细

胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计左线,不计右线。

E 操作时,注意盖玻片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。

初学者易犯的错误: 初学者易犯的错误:::

A 计数前未将待测悬液吹打均匀。

B 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。

C 滴入悬液时的量太多,至使细胞悬液流入旁边的槽中。

三、、、、注意事项

A 本分离液是敏光型的,运输和贮藏过程中在 18-25避光保存,启封后 4保存本品只能用于科学研究,不能用于临床检测

避免微生物污染。本品为真空包装,未启封前于 10 以下易出现白色结晶,影响分离效果。

B 待分离的血液及组织样本要求新鲜,避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在

20水浴箱中复温 20 分钟保证分离液和所分离样本温度在 20±2时分离效果,且

所有操作过程一定要在无菌条件下进行。

C 由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季差异,可能影响分离

效果,用户可调节离心转数及离心时间,摸索*的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。

D 使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。

E *抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素。注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积。

F 分离过程中所用其他试剂如:羟乙一基淀粉 550、全血及组织稀释液、细胞洗涤液及

红细胞裂解液等以我公司产品为*选择,本公司相关系列产品无菌、无病毒、无支原体、

低内毒素水平且无细胞毒性,所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。

四、、、、 产品性能指标

pH 7.0-7.5

渗透压 280-340mOsmol/kg

内毒素 0.5...EU/ml

无菌 直接接种培养 14 天后培养基澄清

澄明度及不溶性颗粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

五、、、、 贮藏及保存期限 贮藏及保存期限 贮藏及保存期限

18-25避光保存,有效期两年。启封后置 4保存,有效期一周。

注::::若保证无微生物污染,启封后可置 4长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

 



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