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石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

产品型号:

所属分类:病理学检测实验

产品时间:2024-08-30

简要描述:石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡
客户提供固定组织
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准:蜡块、切片、染色图片.实验报告(实验步骤、试剂、耗材等)

详细说明:

服务名称:石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

提供商:上海研研谨生物

规格:石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡


TUNEL凋亡显色法

TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理是当细胞发生凋亡时,DNA内切酶被激活,核小体间的基因组DNA被切断,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)

加上带有生物素(Biotin) 标记的dUTP即Bitin-dUTP.,随后于辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的streptavidin结合, 在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜检测到细胞凋亡。


实验意义

1. TUNEL法是一种分子生物学 与形态学相结合的研究方法,可对完整的单个凋亡细胞或者凋亡小体进行原位染色,可以准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。

2.可用于石蜡切片冰冻切片培养的细胞等进行细胞凋亡检测,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。

3.操作简便快捷,在细胞凋亡的研究中被广泛采用。


实验步骤


1.石蜡切片TUNEL显色法:

①石蜡切片常规脱蜡至水,脱蜡剂二甲苯,至水剂乙醇;

②PBS漂洗3*5 min; .

③加入蛋白酶K工作液37°C反应15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室温固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑥加入适量TdT酶反应液,暗湿盒中37°C反应1 h,用SSC室温15 min终止反应后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H202封闭内源性过氧化物酶活性,室温孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反应30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB显色液后用去离子水漂洗数次;

10选择是否用DAPI复染细胞核;

脱水、透明、中性树胶封片后进行观察。


2.冰冻切片TUNEL显色法:

①新鲜组织经处理后,立即在恒冷冰冻切片机内切片,厚度为5~6 um;

②防脱玻片,贴片,室温阴干约12 h;

③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室温固定10 min, PBS漂洗3x5 min;

④浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中),室温通透30 S-2 min;

⑥加入适量TdT酶反应液,暗湿盒中37°C反应1 h,用SSC室温15 min终止反应后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H2O2封闭内源性过氧化物酶活性,室温孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,379C反应30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB显色液后用去离子水漂洗数次:

@选择是否用DAPI复染细胞核;

脱水、透明、中性树胶封片后进行观察。

实验完成周期及交付标准

1.实验周期: 1-2周

2.交付标准:蜡块、切片、染色图片.实验报告(实验步骤、试剂、耗材等)


需确认的信息

1.样本的种属.

2.样本的类型(固定的组织or蜡块or切片)

3.是否提供试剂盒

4.拍照要求


收费标准服务周期提供结果:

欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电询!


实验代做服务:

ELISA试剂盒免费代检测

CCK8检测

基因组DNA提取


蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫组化

荧光定量PCR

动物模型服务

流式细胞检测

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化实验

细胞划痕

钙离子浓度检测

扫描电镜实验

microRNA测序

动物实验

探针合成

ATP/ADP检测

石蜡/冰冻切片

定点突变

线粒体膜电位(MMP)检测

细胞生长曲线的测定

药理毒理动物实验


免疫共沉淀

真核表达载体构建

染色质免疫沉淀CHIP

非标定量(Label-free)实验




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